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實時熒光定量ＰＣＲ儀（Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?。遥澹幔欤簦椋恚濉。校茫?，ｑＰＣＲ）是***種在分子生物學(xué)研究和臨床診斷中廣泛應(yīng)用的儀器，其核心功能在于實時監(jiān)測并定量分析核酸擴(kuò)增過程。以下從工作原理、技術(shù)特點、應(yīng)用領(lǐng)域、優(yōu)勢及操作要點等方面展開介紹：

***、工作原理

實時熒光定量ＰＣＲ儀結(jié)合了ＰＣＲ擴(kuò)增技術(shù)和熒光信號檢測技術(shù)。在ＰＣＲ反應(yīng)過程中，通過特異性引物擴(kuò)增目標(biāo)ＤＮＡ或ＲＮＡ序列，同時利用熒光標(biāo)記的探針或染料（如ＴａｑＭａｎ探針、ＳＹＢＲ?。牵颍澹澹钊玖希崟r監(jiān)測擴(kuò)增產(chǎn)物的積累。熒光信號的強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物數(shù)量成正比，儀器通過檢測熒光信號的變化，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線或相對定量方法，計算出樣本中目標(biāo)核酸的初始濃度。

二、技術(shù)特點

高靈敏度：能夠檢測極低濃度的核酸模板，適用于微量樣本或早期感染檢測。

高特異性：通過特異性引物和探針設(shè)計，避免非特異性擴(kuò)增的干擾。

實時監(jiān)測：在ＰＣＲ反應(yīng)過程中實時采集熒光信號，無需終點檢測，減少誤差。

定量準(zhǔn)確：結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線或內(nèi)參基因，實現(xiàn)目標(biāo)核酸的絕對或相對定量。

高通量：支持多孔板（如９６孔、３８４孔）檢測，滿足大規(guī)模樣本篩查需求。

三、應(yīng)用領(lǐng)域

臨床診斷：

病原體檢測：快速檢測病毒（如新冠病毒、流感病毒）、細(xì)菌、真菌等感染。

遺傳病診斷：檢測基因突變或多態(tài)性，輔助遺傳性疾病的早期診斷。

腫瘤標(biāo)志物檢測：分析腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)水平，輔助癌癥的早期發(fā)現(xiàn)、預(yù)后評估及個性化治療。

科研領(lǐng)域：

基因表達(dá)分析：研究基因在不同條件下的表達(dá)變化，揭示基因調(diào)控機(jī)制。

微生物學(xué)研究：定量檢測環(huán)境或臨床樣本中的微生物載量，分析微生物群落結(jié)構(gòu)。

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